แอนติเจนของโปรตีนลูกผสมมักจะมีอีพิโทปที่ต่างกันหลายตัว บางตัวเป็นอีพิโทปลำดับและบางตัวเป็นอีพิโทปเชิงโครงสร้างพอลิโคลนอลแอนติบอดีที่ได้รับจากการสร้างภูมิคุ้มกันให้กับสัตว์ด้วยแอนติเจนที่ถูกทำลายคือของผสมของแอนติบอดีที่จำเพาะต่ออีพิโทปแต่ละตัว และสามารถนำมาใช้โดยทั่วไปเพื่อตรวจหาโครงสร้างตามธรรมชาติหรือโปรตีนเป้าหมายที่ถูกทำลายประโยชน์ข้างเคียงของการใช้โปรตีนที่ถูกทำลายเป็นสารก่อภูมิคุ้มกันก็คือ โปรตีนที่ถูกทำลายมีแนวโน้มที่จะสร้างภูมิคุ้มกันได้มากกว่า และสามารถกระตุ้นการตอบสนองของระบบภูมิคุ้มกันที่แข็งแกร่งในสัตว์ได้
โดยปกติแล้วระบบการแสดงออกของ Escherichia coli จะถูกเลือกเพื่อจุดประสงค์ในการสร้างแอนติเจน เนื่องจากเป็นระบบที่มีค่าใช้จ่ายสูงที่สุดในแง่ของเวลาและเงินเพื่อที่จะปรับปรุงความเป็นไปได้ของการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายและความสะดวกในการทำให้บริสุทธิ์ บางครั้งจะแสดงเพียงชิ้นส่วนเล็กๆ ของโปรตีนเป้าหมาย เช่น โดเมนเฉพาะเท่านั้นที่ถูกแสดงออกมา
โครงสร้างสามมิติของโปรตีน
โดเมนเฉพาะของโปรตีน
หากวัตถุประสงค์ของการเตรียมแอนติบอดีมีไว้เพื่อการตรวจหา WB เท่านั้น จะประหยัดและรวดเร็วในการใช้เปปไทด์ขนาดเล็กสังเคราะห์เป็นแอนติเจน แต่มีความเสี่ยงที่ภูมิคุ้มกันอ่อนแอหรือไม่สามารถสร้างใหม่ได้เนื่องจากการเลือกส่วนเปปไทด์ที่ไม่เหมาะสมเนื่องจากการเตรียมแอนติบอดีต้องใช้ระยะเวลานาน จึงมักเลือกส่วนเปปไทด์ที่แตกต่างกันสองหรือสามส่วนเพื่อเตรียมแอนติบอดีโดยใช้โพลีเปปไทด์แอนติเจนเพื่อให้แน่ใจว่าอัตราความสำเร็จของการทดลอง
ความบริสุทธิ์ของแอนติเจนโพลีเปปไทด์สำหรับการสร้างภูมิคุ้มกันจะต้องมากกว่า 80%แม้ว่าความบริสุทธิ์ที่สูงกว่าในทางทฤษฎีสามารถรับแอนติบอดีที่มีความจำเพาะดีกว่าได้ แต่ในทางปฏิบัติ สัตว์มักจะผลิตแอนติบอดีที่ไม่จำเพาะจำนวนมากเสมอ ดังนั้นจึงปิดบังประโยชน์ของความบริสุทธิ์ของแอนติเจน
นอกจากนี้ การเตรียมแอนติบอดีจากเปปไทด์ขนาดเล็กจะต้องเชื่อมโยงข้ามกับแอนติเจนพาหะที่เหมาะสมเพื่อเพิ่มภูมิคุ้มกันพาหะแอนติเจนทั่วไปสองชนิดคือ KLH และ BSA
เวลาโพสต์: 23 มี.ค. 2023